細(xì)胞培養(yǎng)室的常用儀器設(shè)備有哪些?

發(fā)布時(shí)間:2023.02.13 瀏覽次數(shù):

在實(shí)驗(yàn)室內(nèi),還會有以下常用的基本設(shè)備。 

Ⅰ. 儀器:

(1)顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細(xì)胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一,便于掌握細(xì)胞的生長情況并觀察有無污染等。

(2)培養(yǎng)箱:體外培養(yǎng)的細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞一樣,需要在恒定的溫度下生存,大多數(shù)情況下,最適溫度是37℃,溫差變化一般不應(yīng)超過±0.5℃,細(xì)胞在溫度升高2℃時(shí),持續(xù)數(shù)小時(shí)即不能耐受,40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱,如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱。

(3)干燥箱:用于細(xì)胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒。干熱消毒時(shí),電熱干燥箱升溫較高,一般需達(dá)到160℃以上。通常使用鼓風(fēng)式電熱干燥箱。其優(yōu)點(diǎn)是溫度均勻、效果較好,缺點(diǎn)是升溫過程較慢。升溫時(shí)不能先升溫后鼓風(fēng)而應(yīng)鼓風(fēng)與升溫同時(shí)開始,至100℃時(shí),停止鼓風(fēng),應(yīng)避免包裹器皿的紙或棉花燒焦,燒焦的碎屑可影響細(xì)胞的生長。消毒后,不能立即打開箱門以免驟冷而導(dǎo)致玻璃器皿損壞,應(yīng)等候溫度自然下降至100℃以下方可開門。

(4)水純化裝置:細(xì)胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高,細(xì)胞培養(yǎng)以及與細(xì)胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴(yán)格純化處理。水純化時(shí)可采用離子交換裝置或蒸餾器。離子交換純水尚不能有效去除有機(jī)物,因此用水時(shí)尚需再次蒸餾。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水:即使是用于玻璃器皿的沖洗,也應(yīng)使用二次以上蒸餾水。

(5)冰箱:細(xì)胞培養(yǎng)室必須配備。

a.普通冰箱或冷藏柜 

——儲存培養(yǎng)液、生理鹽水、Hank’s液試劑等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標(biāo)本。 

b.低溫冰箱(-20℃)、超低溫冰箱 

——用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時(shí)期存放的制劑,如酶、血清等。 

——細(xì)胞培養(yǎng)室的冰箱應(yīng)屬專用,不得存放易揮發(fā)、易燃燒等對細(xì)胞有害的物質(zhì),且應(yīng)保持清潔。

(6)細(xì)胞冷凍儲存器:儲存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購置液氮容器時(shí)要綜合考慮容積大小,取放使用方便及液氮揮發(fā)量(經(jīng)濟(jì))三種因素。液氮容器的大小可自25L~500L,可以儲存1ml的安瓿250~15000個(gè)左右。液氮溫度可低達(dá)-196℃,使用時(shí)應(yīng)防止凍傷。由于液氮不斷揮發(fā),應(yīng)注意觀察存留液氮情況,及時(shí)定期補(bǔ)充液氮,避免揮發(fā)過多而致細(xì)胞受損。

(7)離心機(jī):進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),常規(guī)需要進(jìn)行制備細(xì)胞懸液、調(diào)整細(xì)胞密度、洗滌、收集細(xì)胞等工作,通常需要使用離心機(jī)。 

a.一般可常規(guī)配置4000rpm的國產(chǎn)臺式離心機(jī),例如細(xì)胞沉降,使用80~100g的離心機(jī)即可,離心力過大有時(shí)可能引起細(xì)胞的損傷。 

b.另外,可根據(jù)需要添置其他類型如大容量或可調(diào)節(jié)溫度的離心機(jī)等。 

c.若需特殊用途,例如某些細(xì)胞的分離制備需梯度離心,則需另行配置實(shí)驗(yàn)所需的具備其他特殊功能的離心機(jī)。

(8)天平:常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。 

分析天平的感量為0.1mg、0.01mg和0.001mg。根據(jù)稱取物質(zhì)的量和稱量精度的要求,選擇適宜級別的天平。要求精密稱定時(shí),當(dāng)取樣量大于100mg選用感量為0.1mg天平,在100-10mg選用感量為0.01mg天平,小于10mg選用感量為0.001mg天平。
細(xì)胞室

(9)消毒器:直接或間接與細(xì)胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。

(10)濾器:目前細(xì)胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液,包括人工合成培養(yǎng)液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長因子等物質(zhì),這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能,因而上述液體多采用濾過消毒以除去細(xì)菌。

Ⅱ. 培養(yǎng)用器皿

(1)培養(yǎng)器皿:供細(xì)胞接種、生長等用的器皿,可由透明度好、無毒的中性硬質(zhì)玻璃或無毒而透明光滑的特制塑料制成。

(a)玻璃培養(yǎng)器皿的優(yōu)點(diǎn)是多數(shù)細(xì)胞均可生長,易于清洗、消毒,可反復(fù)使用,并且透明而便于觀察;缺點(diǎn)是易碎,清洗時(shí)費(fèi)人力。 

(b)塑料制培養(yǎng)器皿的優(yōu)點(diǎn)是一次性使用,廠家已消毒滅菌密封包裝,打開即可用于細(xì)胞培養(yǎng)操作。 

常用的培養(yǎng)器皿: 

培養(yǎng)瓶:由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)、繁殖細(xì)胞。進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,膠塞多用于密封培養(yǎng)。國產(chǎn)培養(yǎng)瓶的規(guī)格以容量(ml)表示,如250ml、100ml、25ml等;進(jìn)口培養(yǎng)瓶則多以底面積(cm2)表示。 

培養(yǎng)皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分離、處理組織或做細(xì)胞毒性、集落形成、單細(xì)胞分離、同位素?fù)饺?、?xì)胞繁殖等實(shí)驗(yàn)使用。常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有10cm、9cm、6cm、3.5cm等。 

多孔培養(yǎng)板:為塑料制品??晒┘?xì)胞克隆及細(xì)胞毒性等各種檢測實(shí)驗(yàn)使用。其優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約樣本及試劑,可同時(shí)測試大量樣本,易于進(jìn)行無菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格,常用的規(guī)格有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。 

各種單層生長的細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中長滿時(shí)可獲得的細(xì)胞數(shù),主要是取決于器皿的底表面積和細(xì)胞體積的大小。常用培養(yǎng)器皿及可獲得的細(xì)胞數(shù)(以Hela細(xì)胞為例)。

(2)培養(yǎng)操作有關(guān)的器皿:

a.貯液瓶:主要用于存放或配制各種培養(yǎng)用液體如培養(yǎng)液、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規(guī)格,如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。 

b.吸管:主要分為刻度吸管、無刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、轉(zhuǎn)移液體,常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規(guī)格。無刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管,除可以作吸取、轉(zhuǎn)移液體外,彎頭尖吸管還常用于吹打、混勻及傳代細(xì)胞。 

c.加樣器(移液器):用于吸取、移動(dòng)液體或滴加樣本??筛鶕?jù)需要調(diào)節(jié)量的大小,吸量準(zhǔn)確、方便。尤以微量加樣器,可保證實(shí)驗(yàn)樣品(或試劑)含量精確,重復(fù)性良好。目前,可高溫消毒的,多通道的各類移液器可供使用者選擇,能確保加樣準(zhǔn)確、快速、方便并且達(dá)到無菌要求。

(3)其他用品:尚有收集細(xì)胞用的離心管,放置試劑或臨時(shí)插置吸管用的試管,裝放吸管以便消毒的玻璃或不銹鋼容器,用于存放小件培養(yǎng)物品便于高壓消毒的鋁制飯盒或貯槽,套于吸管頂部的橡膠吸頭,封閉各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細(xì)胞用的安瓿或凍存管、不同規(guī)格的注射器、燒杯和量筒以及漏斗,超凈工作臺使用的酒精燈,供實(shí)驗(yàn)人員操作前清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型噴壺等。 
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