合理的實驗室分區(qū):
實驗室內(nèi)各工作區(qū)的實驗用品,包括移液器等應專用。如有可能,應在裝有紫外燈的層流式工作臺(如生物安全柜、超凈工作臺)內(nèi),吸加PCR試劑,工作臺內(nèi)應放置PCR專業(yè)用的微量離心機、一次性手套、各量程的移液器和其他必須物品。
正確的實驗操作:
吸加PCR試劑和模板的操作應嚴格按要求進行,吸樣要慢,盡量一次性完成,忌多次抽吸,以免交叉污染或產(chǎn)生氣溶膠污染。
實驗的過程中應勤換手套,在進出不同區(qū)域或進行模板操作后,都應及時更換手套。
裝有PCR試劑的微量離心管在打開之前應先做瞬時離心(約10s),將管壁及管蓋上的液體甩至管底部,從而減少污染手套或加樣器的機會。開管動作要輕,以防管內(nèi)液體濺出或形成氣溶膠,造成污染。
在同時進行多個PCR反應時,應制備主反應混合液,再分裝至PCR反應管,最后添加樣品核酸模板,以減少單個添加操作繁瑣造成的污染。
實驗器具和試劑:
實驗室自己配置的試劑,如去離子水、緩沖液等,在使用之前均應高壓滅菌或過濾除菌。
分裝PCR試劑:所有的PCR試劑都應小量分裝,以減少重復取樣次數(shù),并置于-20℃保存,適當時,最好做到專人專用。另外,PCR試劑、PCR反應液應與樣品及PCR產(chǎn)物分開保存,不應放于同一冰盒或冰箱。
所有吸頭、反應管等應一次性使用,使用之前,都應經(jīng)過高壓處理。若條件允許,最好使用帶濾器的槍頭。各工作區(qū)內(nèi)的移液器要有標識,應固定使用用途,不能交叉使用。
實驗設(shè)計:
實驗設(shè)計方面應遵循實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制的相關(guān)規(guī)定,實驗中至少應:
設(shè)置目標DNA陽性對照反應。對靶序列所作的適當?shù)南♂尮ぷ鲬趯嶒炃霸趯嶒炇覂?nèi)別的位置進行,這樣可防止將靶DNA的濃溶液帶到實驗室中專門進行PCR的位置。
設(shè)置PCR試劑陰性對照和目標DNA陰性對照反應。
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